細胞凋亡檢測

細胞凋亡(apoptosis)是指細胞在一定的生理或病理條件下，受內在遺傳機制控制，按照自身程序主動(dòng)性、生理性的死亡。與被動(dòng)的細胞壞死不同，細胞凋亡是主動(dòng)發(fā)生的，是為更好地適應生存環(huán)境而主動(dòng)爭取的一種死亡過(guò)程，期間涉及一系列基因的激活、表達以及調控等。

細胞凋亡的主要形態(tài)學(xué)特征包括：染色質(zhì)固縮、DNA片段化、細胞膜起泡、細胞皺縮、凋亡小體的形成等。

注：圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )

細胞凋亡檢測方法

檢測細胞凋亡的方法很多，可根據凋亡細胞固有的形態(tài)特征，利用光學(xué)顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡和透射電子顯微鏡等來(lái)觀(guān)察細胞形態(tài)；或根據細胞凋亡過(guò)程中的時(shí)相變化檢測是否發(fā)生凋亡，常見(jiàn)的有Caspase活性檢測、線(xiàn)粒體膜電位檢測、Annexin V檢測、TUNEL檢測等。

?Tunel法檢測

作為研究細胞凋亡的經(jīng)典方法之一的TUNEL法，具有靈敏度高、背景干擾小，毒性低，可定量等特點(diǎn)，被廣泛用于不同細胞或組織樣本的凋亡檢測。TUNEL法最早由Gavrieli于1992年引入，其中末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)是一種不依賴(lài)模板的DNA聚合酶，可以催化脫氧核苷酸結合到斷裂DNA分子的3'-OH末端，且突出、凹陷或平滑末端的單鏈或雙鏈DNA分子均可作為其底物。

注：圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )

細胞凋亡發(fā)生時(shí)，相關(guān)DNA內切酶會(huì )被激活，從而切斷核小體間的DNA。在細胞凋亡晚期，DNA會(huì )被降解為180-200 bp的片段。 TdT介導的dUTP末端標記法(TUNEL)是在TdT的催化下將熒光素標記的dUTP與斷裂DNA暴露的3'-OH聚合，延伸后的DNA可通過(guò)熒光顯微鏡或流式細胞儀進(jìn)行檢測。全式金推出的TransDetect^? In Situ Fluorescein TUNEL Cell Apoptosis Detection Kit產(chǎn)品既依據此原理進(jìn)行細胞凋亡檢測，適用于石蠟組織切片、冰凍組織切片、細胞爬片、細胞涂片以及細胞懸液等樣本。

●TransDetect^? In Situ Fluorescein TUNEL Cell Apoptosis Detection Kit

?產(chǎn)品特點(diǎn)

? 毒性低，不含有傳統TUNEL反應所依賴(lài)的高毒性有機砷化合物緩沖體系。

? 靈敏度高，特異性強，標記與非標記底物采用合適的優(yōu)化比例。

? 操作簡(jiǎn)便，無(wú)需繁瑣的加樣及孵育過(guò)程，反應體系中只需將TdT與Labeling Solution混合，即可完成一步法標記。

? 應用范圍廣，檢測方式靈活。

? 性能展示

HeLa細胞經(jīng)DNase I處理以及經(jīng)Camptothecin誘導發(fā)生凋亡后的熒光顯微鏡檢測

◆ Click it技術(shù)

瑞典皇家科學(xué)院10月5日宣布，將2022年諾貝爾化學(xué)獎授予美國化學(xué)家Carolyn R. Bertozzi，丹麥化學(xué)家Morten Meldal和美國化學(xué)家Karl Barry Sharpless，以表彰他們?yōu)椤包c(diǎn)擊化學(xué)和生物正交化學(xué)”的發(fā)展所做出的突出貢獻?！包c(diǎn)擊化學(xué)”（Click chemistry）的概念最先由Barry Sharpless在2000年提出，在該化學(xué)反應中，反應快速發(fā)生，避免了不必要的副產(chǎn)品。不久之后，Carolyn R. Bertozzi和Morten Meldal相互獨立地發(fā)現了現代點(diǎn)擊化學(xué)王冠上的明珠：銅催化疊氮-炔環(huán)加成反應，這一優(yōu)雅而高級的化學(xué)反應，在藥物開(kāi)發(fā)、DNA定位和創(chuàng )造新材料等方面被廣泛使用。

作為點(diǎn)擊化學(xué)代表反應的銅催化疊氮-炔環(huán)加成，在細胞檢測中發(fā)揮著(zhù)重大的作用。胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物，EdU（5-ethynyl-2’-deoxyuridine）可以在DNA合成過(guò)程中摻入到DNA鏈中，也可在末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）的催化下，與DNA斷裂時(shí)暴露出的3’-OH結合進(jìn)而摻入到DNA末端。EdU的炔基是一種生物惰性基團，可以通過(guò)銅催化疊氮-炔環(huán)加成反應與染料的疊氮基發(fā)生極強的選擇性反應，從而生成1,2,3-三唑產(chǎn)物。由此，銅誘導的點(diǎn)擊化學(xué)反應將EdU的炔基和染料疊氮基高效連接，可以用來(lái)指示DNA，再通過(guò)流式細胞術(shù)或熒光顯微鏡對細胞凋亡進(jìn)行檢測。

注：圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )

全式金目前已將Click it技術(shù)應用于細胞凋亡檢測，全新推出了3款多色熒光標記的TUNEL檢測試劑盒，具有毒性低、靈敏度高，特異性強、操作簡(jiǎn)單，快速等特點(diǎn)，可用于不同組織或細胞樣本的檢測。

●TransDetect^?In Situ Click TUNEL Imaging Kit-488 Fluorophore

●TransDetect^?In Situ Click TUNEL Imaging Kit-555 Fluorophore

●TransDetect^?In Situ Click TUNEL Imaging Kit-594 Fluorophore

? 產(chǎn)品特點(diǎn)

?毒性低，不含有傳統TUNEL反應所依賴(lài)的高毒性有機砷化合物緩沖體系。

? 操作簡(jiǎn)單、快速。

?可用于不同細胞或組織樣本的檢測。

? 性能展示

? Hela細胞經(jīng)Dnase I處理后，分別用Company T和TransGen產(chǎn)品檢測細胞凋亡的熒光成像結果。

?Hela細胞經(jīng)Dnase I處理后，TransDetect^?In Situ Click TUNEL Imaging Kit-555 Fluorophore 檢測細胞凋亡的熒光成像結果。

? Hela細胞經(jīng)Dnase I處理后，TransDetect^?In Situ Click TUNEL Imaging Kit-594 Fluorophore 檢測細胞凋亡的熒光成像結果。

? Caspase酶活化分析

Caspase家族在介導細胞凋亡的過(guò)程中起著(zhù)非常重要的作用，其中Caspase-3是凋亡通路下游的水解酶，它在凋亡信號傳導的許多途徑中發(fā)揮功能。正常細胞中Caspase-3以酶原形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段被激活，裂解相應的胞漿胞核底物，最終導致細胞凋亡。因此，Caspase-3常被作為細胞凋亡的早期檢測指標。

? 線(xiàn)粒體膜電位檢測

在細胞凋亡的過(guò)程中往往伴隨著(zhù)線(xiàn)粒體跨膜電位的破壞，這被廣泛認為是細胞凋亡早期的一個(gè)標志性事件，其中JC-1流式檢測是最常見(jiàn)的線(xiàn)粒體膜電位檢測方法，可通過(guò)其熒光的增強或減弱反映線(xiàn)粒體內膜電負性的增高或降低。

? Annexin V法檢測

Annexin V是檢測早期細胞凋亡的最靈敏指標之一。正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜磷脂雙分子層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞質(zhì)膜內側的磷脂酰絲氨酸發(fā)生外翻，暴露于細胞質(zhì)膜的外側。Annexin V是一種與磷脂酰絲氨酸有高度親和力的Ca2+依賴(lài)性磷脂結合蛋白，因此能夠利用Annexin V與細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸相結合的性質(zhì)，檢測細胞的早期凋亡。

全式金目前已推出4款Annexin V檢測試劑盒，搭配不同的探針與染料，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行早期凋亡的檢測，兼具操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強等優(yōu)點(diǎn)。

●TransDetect^?Annexin V-FITC/PI Cell Apoptosis Detection Kit

碘化丙啶(PI)是一種核酸染料，它不能透過(guò)具備完整細胞膜的正常細胞和早期凋亡細胞，但能夠透過(guò)凋亡中晚期的細胞和壞死細胞的細胞膜而將細胞核染色，在特定激發(fā)光條件下呈現紅色。本產(chǎn)品以綠色熒光FITC標記的Annexin V為探針與PI匹配使用，可區分處于不同凋亡時(shí)期的細胞。

? 性能展示

Jurkat T淋巴瘤細胞經(jīng)Camptothecin誘導發(fā)生凋亡后的流式細胞儀檢測結果

●TransDetect^?Annexin V-EGFP/PI Cell Apoptosis Detection Kit

本產(chǎn)品以融合蛋白Annexin V-EGFP為探針與PI匹配使用，可區分處于不同凋亡時(shí)期的細胞。與FITC相比，EGFP更加穩定，熒光更強且不易猝滅。由于A(yíng)nnexin V-EGFP是融合蛋白，EGFP與PS的結合是1：1，因此還可進(jìn)行定量檢測。

?性能展示

Jurkat T淋巴瘤細胞經(jīng)Camptothecin誘導發(fā)生凋亡后的流式細胞儀檢測結果

●TransDetect^? Annexin V-PE/7-AAD Cell Apoptosis Detection Kit

7-AAD是一種核酸染料，它不能透過(guò)具備完整細胞膜的正常細胞和早期凋亡細胞，但能夠透過(guò)凋亡中晚期的細胞和壞死細胞的細胞膜而將細胞核染色。本產(chǎn)品以藻紅蛋白(R-Phycoerythrin，R-PE)標記的Annexin V作為探針與7-AAD核酸染料匹配使用，可區分處于不同凋亡時(shí)期的細胞。藻紅蛋白具有更強的熒光強度且不容易淬滅，對于已經(jīng)表達GFP綠色熒光蛋白的細胞也可使用。

?性能展示

Jurkat T淋巴瘤細胞經(jīng)Camptothecin誘導發(fā)生凋亡后的流式細胞儀檢測結果

●TransDetect^? Annexin V-PE/TransDG Cell Apoptosis Detection Kit

本產(chǎn)品以藻紅蛋白(R-Phycoerythrin，R-PE)標記的Annexin V作為探針與TransDG核酸染料匹配使用，可區分處于不同凋亡時(shí)期的細胞。TransDG是全式金自主研發(fā)的熒光染料，不能透過(guò)具備完整細胞膜的正常細胞和早期凋亡細胞，但能夠透過(guò)凋亡中晚期的細胞和壞死細胞的細胞膜而將細胞核染色。

? 性能展示

Jurkat T淋巴瘤細胞經(jīng)Camptothecin誘導發(fā)生凋亡后的流式細胞儀檢測結果

產(chǎn)品信息