支原體污染解決方案

支原體是一種類(lèi)似細菌但不具有細胞壁的原核微生物，直徑在 50-300 nm，可輕松通過(guò)一般濾膜（0.22 μm）混入培養系統中，普通的抗生素（如培養細胞常用的雙抗）對它不起作用。支原體以寄生和共生方式存活，部分可能導致動(dòng)物、植物宿主的病變。

支原體是細胞污染物中比較常見(jiàn)的一種，來(lái)源廣泛，常見(jiàn)的主要來(lái)自培養試劑、人員操作、細胞間交叉污染及組織來(lái)源。受支原體污染的細胞生長(cháng)會(huì )變慢，狀態(tài)會(huì )變差，雖不會(huì )馬上使細胞致死，但卻會(huì )影響細胞內的各種參數，如改變細胞膜抗原性，改變細胞新陳代謝，干擾核酸的合成，改變 DNA 轉染效率，導致染色體畸變等，這些影響會(huì )造成實(shí)驗結果不準確，重復性差，甚至得出錯誤的結論。2013年業(yè)界頂級期刊《Nature》已正式要求投稿的文章如涉及細胞培養，都必須要進(jìn)行支原體檢測。此外，支原體污染檢測也是生物藥研發(fā)與生產(chǎn)的重要質(zhì)控指標，必須在生物藥產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的各個(gè)階段進(jìn)行，包括原材料、細胞庫、病毒種子庫、未加工的收獲液材料和最終產(chǎn)品。

常見(jiàn)的支原體檢測方法

支原體不僅僅會(huì )影響細胞狀態(tài)，在實(shí)驗過(guò)程中受污染的支原體會(huì )成為感染源可以感染其它細胞，因此支原體的去除與預防也至關(guān)重要。全式金推出快速、高效的支原體檢測試劑，高去除率、低毒性的去除試劑及使用方便、可替代雙抗的預防試劑，全方位助力消除支原體污染。

支原體檢測

TransDetect^? PCR Mycoplasma Detection Kit

本產(chǎn)品通過(guò) PCR 方法檢測培養細胞等生物材料中的支原體，針對支原體 16S rRNA 序列保守區域設計特異引物，直接使用細胞培養液作為模板，特異性擴增支原體 DNA，具有操作簡(jiǎn)便、快速（2 小時(shí)內即可出結果）、 特異性強、靈敏度高的特點(diǎn)。

? 靈敏度高，可檢測到低至 20 個(gè)拷貝的支原體 DNA。

? 特異性強，只擴增支原體 DNA，真核細胞和細菌 DNA 不被擴增。

? 操作簡(jiǎn)便，無(wú)需提取基因組 DNA，適合大量細胞樣品的檢測。

? 配有陽(yáng)性對照與陰性對照，保證 PCR 檢測結果的準確性。

TransDetect^? Luciferase Mycoplasma Detection Kit

本產(chǎn)品利用支原體中所特有的酶設計而成，該酶分解 MycoDetect Substrate 的同時(shí)將 ADP 轉換成ATP，熒光素酶在 ATP 存在的條件下催化熒光素（luciferin）氧化發(fā)出生物熒光，通過(guò)檢測生物熒光可 以表征細胞培養物是否存在支原體污染。由于檢測的是真正具有生物活性的支原體，所以得到的結果 比 PCR 檢測方法更加準確。該方法靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)。

TransDetect^? qPCR Mycoplasma Detection Kit

本產(chǎn)品采用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測支原體DNA，用于定性檢測如培養基、細胞培養物、生物制品等樣品中的支原體污染?？蓹z測的支原體種類(lèi)涵蓋范圍廣，包括柔膜菌綱（Mollicutes）下的多種支原體（Mycoplasma spp.）、無(wú)膽甾原體（Acholeplasma spp.）、螺原體（Spiroplasma spp.）等。本試劑盒按照EP 2.6.7和JP G3支原體檢測相關(guān)指南和要求進(jìn)行驗證。? 支原體種類(lèi)覆蓋范圍廣：已驗證13 株菌株及質(zhì)粒DNA 的支原體檢測，數據庫比對可覆蓋至少129 種支原體DNA 序列。

? 靈敏度高：驗證的支原體滿(mǎn)足95% 的檢出要求，檢測限可達10 CFU/mL；質(zhì)粒標準品可達1 copy/μL。

? 特異性高：常見(jiàn)的近20 種細菌、生產(chǎn)用細胞等基因組無(wú)檢測干擾。

? 穩定性高：產(chǎn)品至少可凍融15 次，產(chǎn)品性能無(wú)明顯影響。

? dUTP/UDG 防污染系統：有效防止PCR 產(chǎn)物的污染，數據準確。

? 儀器兼容性廣：主流qPCR 檢測儀器均可兼容，檢測結果一致。

靈敏度高

10 種10 CFU/mL 支原體標準株DNA 的擴增結果顯示，TransGen 產(chǎn)品在檢出限10 CFU/mL 濃度下，檢出率可達到100%。（擴增圖是發(fā)酵支原體標準品檢測結果展示）

特異性高

以上物種基因組DNA 的擴增結果均為陰性，表明TransGen 產(chǎn)品特異性高，與非支原體物種無(wú)交叉反應。

耐用性高

分別用以上基質(zhì)稀釋陽(yáng)性支原體懸液，對照基質(zhì)為無(wú)核酸酶水，DNA 提取后進(jìn)行qPCR 檢測。結果表明，各基質(zhì)組的Ct 值與對照接近， Ct 值滯后不超過(guò)0.6，上述基質(zhì)對支原體檢測無(wú)明顯影響。

支原體去除

 TransSafe^TM Mycoplasma Elimination Reagent (TransMyco Plus) Kit

本產(chǎn)品包含兩類(lèi)抗生素組分，第一類(lèi)抗生素干擾支原體的蛋白表達，第二類(lèi)抗生素干擾支原體的 DNA復制，從而可以有效去除支原體污染。本產(chǎn)品對真核細胞干擾小，細胞毒性低，可以保持較高的細胞活率。

? 支原體清除效率高。

? 使用濃度低，細胞毒性小，適用細胞種類(lèi)廣。

? 使用方便，直接加入培養基中即可。

支原體預防

TransSafe^TM?Mycoplasma Prevention Reagent

本產(chǎn)品是對支原體具有抑制作用的三種抗生素的混合物，分別為大環(huán)內酯類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)和氟喹諾酮類(lèi)衍生物抗生素，可以有效干擾支原體的蛋白表達和DNA復制。

? 支原體預防效果好，可以最大程度地避免支原體污染。

? 使用濃度低，細胞毒性小，適用細胞種類(lèi)廣。

? 使用方便，直接加入培養基中即可。

? 抗性范圍廣，可替代雙抗預防常見(jiàn)的革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌。

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