mRNA體外合成整體解決方案
mRNA（Messenger RNA），即信使RNA，是以DNA的一條鏈為模板轉錄而來(lái)，攜帶遺傳信息并指導蛋白質(zhì)的合成。mRNA疫苗是指將編碼抗原的mRNA引入體內，利用宿主細胞自身的蛋白質(zhì)合成機制產(chǎn)生抗原蛋白，進(jìn)而觸發(fā)機體的免疫應答，達到預防疾病的目的。
新冠疫情在全球的肆虐，促進(jìn)了mRNA技術(shù)的發(fā)展，使其成為2021年《麻省理工科技評論》發(fā)布的“全球十大突破性技術(shù)”之首。也將疫苗的研發(fā)推上了新的高潮，全球的大型藥企均在抓緊時(shí)間布局新冠疫苗的研發(fā)。到目前為止，被批準進(jìn)入臨床試驗的疫苗類(lèi)型主要包括：滅活疫苗、核酸疫苗、載體疫苗、亞單位疫苗、病毒樣顆粒疫苗和減毒活疫苗。而核酸疫苗中的mRNA疫苗在研發(fā)和生產(chǎn)等方面具備顯著(zhù)優(yōu)勢，憑借其研發(fā)周期短、抗原選擇范圍廣；安全性高；有效性高、穩定性好；生產(chǎn)難度低、速度快等優(yōu)勢，吸引了越來(lái)越多的企業(yè)進(jìn)入到mRNA疫苗的研發(fā)行列。mRNA技術(shù)經(jīng)過(guò)30多年的發(fā)展已日漸成熟，但要制備安全、高效、穩定的mRNA疫苗，仍然存在一些難題，比如合成與純化足夠蛋白表達量的mRNA，mRNA在體內的有效靶向遞送等。
mRNA疫苗的研發(fā)與生產(chǎn)流程主要包括以下步驟：
1. 篩選分離目標病原體；
2. 利用NGS技術(shù)進(jìn)行基因測序；
3. 篩選出對感染或復制重要的編碼目標蛋白對應的基因序列（或直接提取mRNA）構建pDNA質(zhì)粒；
4. 體外轉錄：通常使用限制性核酸內切酶線(xiàn)性化的pDNA質(zhì)粒作為模板，酶切位點(diǎn)選擇在質(zhì)粒3’端的下游位置，隨后再次使用沉淀和提取純化線(xiàn)性DNA。轉錄過(guò)程還需要的一些酶包括：來(lái)自T7、T3或SP6噬菌體的RNA聚合酶、RNA酶抑制劑和無(wú)機焦磷酸酶（去除RNA合成過(guò)程中產(chǎn)生的的焦磷酸酯并競爭性地抑制轉錄）。最后，使用RNase-free的DNA酶消化模板DNA。
5. 對mRNA進(jìn)行高度純化；
6. 制備mRNA無(wú)菌制劑；
7. 配送給需要接種的人群。
疫情當前，國內外許多企業(yè)和機構大量投入研發(fā)，建立mRNA疫苗新型研發(fā)平臺。作為國產(chǎn)生物試劑優(yōu)質(zhì)供應商，全式金為這些企業(yè)提供一系列相關(guān)產(chǎn)品，助力mRNA疫苗研發(fā)。
目標抗原靶點(diǎn)篩選
1. TransStart? FastPfu Fly DNA Polymerase（AP231）
一種用于快速PCR的熱啟動(dòng)超高保真DNA聚合酶，該酶擴增速度更快 (6 kb/min)，擴增效率更高，產(chǎn)量更高，保真性更高，靈敏度更高。
· 保真性是EasyTaq? DNA Polymerase的108倍。
· 擴增產(chǎn)物為平端，可直接克隆于pEASY?-Blunt 系列載體中。
· 基因組DNA 片段的擴增 (≤ 15 kb)。
· Plasmid DNA片段擴增 (≤ 20 kb)。
dNTPs是PCR的重要組成，它的質(zhì)量好壞嚴重影響PCR的保真性、特異性、擴增效率。High Pure dNTPs（AD101）是美國進(jìn)口，市場(chǎng)上純度較高的dNTPs，純度在99%以上，不含DNase和RNase。
質(zhì)粒及模板制備
1. EasyPure? EndoFree Plasmid MaxiPrep Kit（EM122）
利用硅膠膜離心柱特異地吸附DNA，適用于從≤500 ml LB培養基培養的大腸桿菌中高效地提取質(zhì)粒DNA，可通過(guò)顏色變化識別裂解、中和是否完全，實(shí)現操作的可視化；柱上去除內毒素，操作簡(jiǎn)便快速。提取的質(zhì)粒DNA適用于酶切、連接、轉化、測序等實(shí)驗。
2. EasyPure? EndoFree Pro Plasmid MaxiPrep Kit（EM123）
利用硅膠膜離心柱特異地吸附DNA，適用于從≤500 ml LB培養基培養的大腸桿菌中高效地提取質(zhì)粒DNA，操作簡(jiǎn)單，提取速度快，DNA純度高。提取的質(zhì)粒DNA適用于酶切、連接、轉化、測序等實(shí)驗。
3. FlyCut? 系列內切酶
FlyCut? 系列5分鐘快速內切酶，配有通用的專(zhuān)利性配方的特殊緩沖液，具有省時(shí)、高效（酶切效率高，無(wú)星號活性）的特點(diǎn)。
4. Phi29 DNA Polymerase（LP101）
由重組φ29 DNA polymerase 基因的載體，在大腸桿菌中經(jīng)誘導表達、純化而成, 分子量為74.4 kDa。具有高保真、高效率、高靈敏度、高產(chǎn)量的特點(diǎn)，用于測序、SNP基因分型、STR/微衛星分析、病毒檢測和miRNA檢測。
體外轉錄
1. T7 High Efficiency Transcription Kit（JT101）
利用T7 RNA Polymerase，以含有T7啟動(dòng)子的超螺旋質(zhì)粒DNA或線(xiàn)性DNA為模板，對T7啟動(dòng)子下游的DNA序列進(jìn)行高效轉錄。適用于制備長(cháng)度超過(guò)6000 nt的高濃度RNA，制備的RNA可用于體外翻譯、RNase保護實(shí)驗、RNA剪切以及雜交探針標記等。全式金T7 RNA聚合酶轉錄試劑盒在每20 μl體系中，1 μg模板可以生成150-280 μg的RNA。
2. Ribonuclease Inhibitor（AI101）
在mRNA疫苗研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程需要保持mRNA的穩定性以保證疫苗高質(zhì)量生產(chǎn)。全式金RNase抑制劑酶Ribonuclease Inhibitor是經(jīng)大腸桿菌表達、純化的人胎盤(pán)的重組蛋白，特異性地抑制RNase A、RNase B和RNase C，活性高能夠顯著(zhù)穩定mRNA的存在。
3. DNase I (RNase-free ) （GD201）
在mRNA疫苗生產(chǎn)的過(guò)程中對DNA的殘留控制非常嚴格，全式金DNase I (RNase-free )能夠隨機分解DNA單/雙鏈，酶活性高，性能優(yōu)。
mRNA修飾
本產(chǎn)品包含牛痘病毒加帽酶、mRNA帽結構2’-O-甲基轉移酶和其他加帽反應組分，可用于對T7體外轉錄（JT101）產(chǎn)生的RNA進(jìn)行5’加帽修飾，具有高效、高靈活性、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。反應產(chǎn)物為Cap1-mRNA，加帽效率可接近100%，并且帽子結構方向正確，對于mRNA的穩定、轉運（出核）、翻譯過(guò)程均有重要作用。
2. mRNA Poly(A) Tailing Kit（LA201）
本產(chǎn)品反應時(shí)不依賴(lài)模板的存在，催化ATP轉化為AMP并依次摻入到RNA的3′ 末端，即在mRNA的3′ 端加Poly(A) 尾，提高RNA在細胞中的穩定性。本產(chǎn)品具有很高的加尾效率，且可平行放大體系用于在體外轉錄（JT101）及加帽后（LC101）mRNA 的加尾修飾，制備可用于細胞轉染的RNA樣品。具有高效率、高靈活性、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。
樣品純化
DNA純化
1. MagicPure? Size Selection DNA Beads（EC401）
基于Solid Phase Reverse Immobilization (SPRI) 原理，采用具有獨特分離作用的磁珠與緩沖液系統，適用于DNA純化、DNA濃縮、高通量測序文庫構建中DNA片段分選，使用方法可與主流文庫構建試劑盒兼容。
RNA純化
1. MagicPure? mRNA Kit (EC511)
偶聯(lián)了Oligo (dT)的磁珠與帶Poly(A)尾的mRNA特異結合，純化后的mRNA純度高，完整性好，得到的mRNA適用于RT-PCR、qRT-PCR、二代測序等。本試劑盒適用于磁棒式高通量核酸提取儀。
2. EasyPure? RNA Purification Kit (ER701)
利用硅膠膜離心柱特異地吸附RNA，純化經(jīng)DNase I處理的總RNA產(chǎn)物、體外轉錄產(chǎn)物、RNA標記產(chǎn)物、合成RNA等，能有效地去除蛋白質(zhì)、有機化合物、無(wú)機鹽離子等雜質(zhì)，操作簡(jiǎn)便、快速。
3. MagicPure? RNA Beads (EC501)
利用獨特的磁珠與緩沖液系統，特異地吸附RNA，純化去除rRNA的RNA產(chǎn)物，經(jīng)DNase I處理的RNA產(chǎn)物，純化體外轉錄產(chǎn)物、RNA標記產(chǎn)物和合成RNA等。操作簡(jiǎn)便、快速。
mRNA轉染
TransIntro? mRNA Transfection Reagent (FT501)
一款高性能的mRNA專(zhuān)用的陽(yáng)離子聚合物轉染試劑，可直接將mRNA傳遞到細胞質(zhì)中進(jìn)行表達，避免了轉錄調控作用及進(jìn)入細胞核的限制，比常規DNA轉染方法效率更高。該試劑毒性低，轉染效率高，對常規細胞和難轉染細胞均有比較好的效果，且不受血清和抗生素的影響，性能穩定。
基因測序
全式金擁有DNA文庫構建、RNA文庫構建、rRNA去除試劑盒、mRNA捕獲試劑盒及文庫擴增試劑盒等產(chǎn)品。
1. DNA文庫構建（轉座酶法/傳統DNA建庫法/片段化酶法）
★TransNGS? Tn5 DNA Library Prep Kit for Illumina? (for 50 ng/5 ng/1 ng DNA) (KP101/KP121/KP111)
★TransNGS? DNA Library Prep Kit for Illumina? (KP201)
★TransNGS? Fragmentase DNA Library Prep Kit for Illumina?(KP231)
★TransNGS? Fragmentase DNA Library Prep Kit for Illumina?(KP241)
2. RNA文庫構建
★TransNGS? Fast RNA-Seq Library Prep Kit for Illumina?（KP701）
★TransNGS? Fast RNA-Seq Library Prep Kit for MGI?（KP801）
3. rRNA去除（人/小鼠/大鼠）
★TransNGS? rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) (KD101)
4. mRNA磁珠捕獲
★MagicPure? mRNA Kit（EC511）
5. 文庫擴增及qPCR精確定量
★TransNGS? Library Amplification SuperMix（KA101）
★TransNGS? Library Quantification Kit for Illumina?（KQ101）
自動(dòng)核酸提取儀
TS-32/96自動(dòng)核酸提取儀是采用先進(jìn)磁珠分離技術(shù)的高科技產(chǎn)品，具有自動(dòng)化程度高，提取速度快，結果穩定，操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。全式金作為國內知名的核酸分離純化技術(shù)公司，可提供多種配套提取試劑盒，使儀器的使用范圍最大化，成本低廉化。
mRNA疫苗是一種通用的新型平臺技術(shù)，將來(lái)應用前景十分廣泛，不僅僅是新冠等感染性疾病，還有望用于癌癥等諸多領(lǐng)域。針對mRNA疫苗研發(fā)生產(chǎn)，全式金擁有完整的mRNA體外合成產(chǎn)品線(xiàn)，能提供一系列體外合成酶及試劑，幫助各位客戶(hù)朋友們應對研發(fā)過(guò)程中各項關(guān)鍵技術(shù)挑戰，助力開(kāi)創(chuàng )疾病治療的“mRNA時(shí)代”。
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