宿主細胞殘留DNA提取及檢測

當前，各類(lèi)生物制品已被廣泛應用于預防和治療疾病，尤其是新冠疫情爆發(fā)以來(lái)，在治療藥物篩選和疫苗研發(fā)等方面更是加大攻關(guān)力度。生物制品中的疫苗、抗體藥、重組蛋白等產(chǎn)品是在連續傳代的菌種株/細胞株上進(jìn)行表達和生產(chǎn)，雖然經(jīng)過(guò)嚴格的純化工藝，但產(chǎn)品中仍有可能存在宿主細胞殘留的DNA片段，而這些殘留DNA不僅會(huì )降低生物制品的有效性，還存在傳染性和致瘤性的危險。因此從生物制品有效性需求和安全角度考慮，宿主細胞殘留DNA是各項質(zhì)控標準的重中之重。

各國藥品監管機構對宿主細胞殘留DNA的含量均有著(zhù)嚴格的限度控制，也提供了多種經(jīng)典的檢測方法。建立合適的宿主細胞殘留DNA檢測方法對于監測生物制品的安全性和質(zhì)量可控性至關(guān)重要。

宿主細胞殘留DNA的限定標準

宿主細胞殘留DNA定量檢測方法

其中，qPCR法因其具有高靈敏度、特異性、準確性和耐用性等特點(diǎn)，現已成為生物制品工藝研究和產(chǎn)品質(zhì)量控制的首選檢測方法。

為解決宿主殘留DNA引起的生物制品安全性問(wèn)題，全式金自主研發(fā)了2款宿主細胞殘留DNA提取試劑盒以及3款宿主細胞(Vero、CHO、E.coli)殘留DNA的qPCR法檢測試劑盒，可快速高效提取并檢測生物制品中宿主DNA的殘留量。

宿主細胞殘留DNA提取

1. MagicPure^? Host Cell Residual DNA Kit (EH201)

2. MagicPure^? 32 Host Cell Residual DNA Kit (EH201-32)

產(chǎn)品特點(diǎn)

★ 適用于從≤200 μl生物制品樣本中提取宿主細胞(CHO、Vero、NSO、MDCK等)的微量DNA片段；

★ 殘留DNA回收率高；

★ 操作簡(jiǎn)單，無(wú)需離心，提取速度快；

★ 提取量高，純度高；

★ 可搭配高通量磁棒式核酸提取儀，其中EH201-32配套32通道自動(dòng)化核酸提取儀使用。

實(shí)驗數據

分別以100-0.001 pg/μl（10倍梯度稀釋?zhuān)舛鹊腣ero碎片化DNA樣品為模板，使用TransGen和Company S產(chǎn)品進(jìn)行宿主細胞殘留DNA提取回收并測試。結果表明，TransGen產(chǎn)品具有更高的DNA回收率。

3. TS-32 自動(dòng)核酸提取儀 (TS-32) 

★ 觸屏操控，自由編程；

★ 自控系統，安全智能；

★ 精確控制，高效控溫；

★ 紫外消毒，杜絕污染；

★ 結果穩定，高效提??；

★ 試劑開(kāi)放，兼容性好。

宿主細胞殘留DNA檢測

1.PerfectStart^? Vero DNA Quantification Kit (DH111)

2.PerfectStart^? CHO DNA Quantification Kit (DH121)

3.PerfectStart^? E.coli DNA Quantification Kit (DH131)

4.PerfectStart^? Pichia DNA Quantification Kit (DH141)

5.PerfectStart^? SV40LTA& E1A DNA Quantification Kit (DH151)

6.PerfectStart^? HEK293 DNA Quantification Kit (DH152)

產(chǎn)品特點(diǎn)

★ 3種抗體封閉，特異性高，靈敏度高，擴增效率高，線(xiàn)性范圍廣；

★ 特殊優(yōu)化的qPCR反應緩沖液，可提供更高的延伸速度，靈敏度和特異性；

★ 使用UDG酶和dUTP，有效防止PCR產(chǎn)物的污染，數據準確；

★ 專(zhuān)屬性強：不同細胞系之間無(wú)交叉反應；

★ 準確性高：DNA標準品檢測值偏差＜5%；

★ 耐用性強：DNA碎片化不會(huì )對檢測結果造成影響，碎片化DNA回收率高；可適配多種qPCR儀器；

★ 穩定性高：經(jīng)反復凍融7次或4℃、室溫以及37℃放置8天后，產(chǎn)品性能均無(wú)影響。

實(shí)驗數據

線(xiàn)性范圍廣

以梯度稀釋的宿主細胞DNA標準品為模板，使用TransGen產(chǎn)品進(jìn)行宿主細胞殘留DNA定量檢測。結果表明，TransGen產(chǎn)品具有寬廣的線(xiàn)性范圍。

DH111-Vero 線(xiàn)性范圍為：3 fg/μl-300 pg/μl，R²=1.000，擴增效率為 102.3%，各濃度檢測值 CV<15%。

DH121-CHO 線(xiàn)性范圍為：3 fg/μl-300 pg/μl，R²=1.000，擴增效率為 97.6%，各濃度檢測值 CV<15%。

DH131-E.coli 線(xiàn)性范圍為：50 fg/μl-500 pg/μl，R²=0.999，擴增效率為 98.4%，各濃度檢測值 CV<15%。

DH141-Pichia 線(xiàn)性范圍為：30 fg/μl-300 pg/μl，R²=1，擴增效率為 99.3%，各濃度檢測值 CV<15%。

DH151-SV40LTA&E1A 線(xiàn)性范圍為：3×10² copies/μl-3×10⁶ copies/μl，R²=1，SV40LTA擴增效率為 98.7%，E1A擴增效率為 100.9%，各濃度檢測值 CV<15%。

                                                                   SV40LTA

                                                                     E1A

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