Q：培養基 pH 值異常

A：

? 二氧化碳分壓設置錯誤：根據培養基中碳酸氫鈉的濃度而增加或降低培養箱中二氧化碳分壓。

? 培養箱無(wú)二氧化碳：定期觀(guān)察二氧化碳壓力表，及時(shí)更換二氧化碳鋼瓶。

? 細胞培養瓶蓋擰得過(guò)緊：將蓋子旋松 1/4 圈，或換成透氣蓋培養瓶。

? 細菌、真菌污染 丟棄細胞和培養基。

? 培養基中的平衡鹽不匹配：二氧化碳平衡環(huán)境中使用以 Earle's 平衡鹽為基礎的培養基，大氣條件下使用以Hank's 平衡鹽為基礎的培養基。

? 碳酸氫鹽緩沖系統緩沖能力不足：加入 HEPES 緩沖液，使其終濃度為 10-25 mM。

Q：細胞生長(cháng)緩慢

A：

? 培養基或血清改變：比較不同培養基中葡萄糖、氨基酸等成分有無(wú)差異；增加細胞接種密度；更換新鮮培養基。

? 必需生長(cháng)促進(jìn)成分 ( 如 L- 谷氨酰胺或生長(cháng)因子 ) 缺乏、耗盡或降解使用新鮮培養基或向現有培養基中添加必需成分。

? 細胞初始接種密度過(guò)低：增大細胞接種密度。

? 支原體污染：檢測培養物有無(wú)支原體污染，如果被污染，則棄之，或用支原體清除試劑進(jìn)行清除。

? 細胞代次過(guò)高：取用新的細胞。

? 輕度細菌或真菌污染：在添加抗生素的培養基中培養細胞，如果培養物被污染，則棄之。

試劑儲存不當血清應置于-5℃至 -20℃下儲存 ；培養基應置于 2-8℃下避光儲存；完全培養基應置于2-8℃下避光儲存，并限在2周內使用。

Q：細胞死亡

A：

? 胰酶消化過(guò)度：縮短胰酶消化時(shí)間或降低消化用胰酶的工作濃度。

? 細胞狀態(tài)差：取用新的細胞。

? 支原體污染：檢測培養物有無(wú)支原體污染，如果被污染，則棄之，或用支原體清除試劑進(jìn)行清除。

? 培養基中無(wú)附著(zhù)因子：如采用無(wú)血清培養方法，應確保其含有附著(zhù)因子，或使用包被過(guò)的培養器皿。

? 培養箱中無(wú)二氧化碳：定期觀(guān)察二氧化碳壓力表，及時(shí)更換二氧化碳鋼瓶。

? 培養箱溫度有波動(dòng)：監測培養箱內溫度。

? 轉染試劑毒性過(guò)強，細胞代次過(guò)高，質(zhì)粒純度差使用低毒性的轉染試劑或在轉染后及時(shí)換液；使用低代次細胞轉染 ；使用高品質(zhì)的質(zhì)粒轉染。

? 細胞解凍或凍存過(guò)程中損傷大：取用新的細胞。

? 培養基的滲透壓不正確：檢查完全培養基的滲透壓。大多數哺乳動(dòng)物細胞可耐受的滲透壓為 260-350 mOsmol/kg，昆蟲(chóng)細胞可耐受的滲透壓為 340-380 mOsmol/kg。

? 培養基中有毒代謝產(chǎn)物蓄積過(guò)多：更換新鮮培養基。